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防止目的基因反向连接 质粒与目的基因为什么会反向连接？

实习编辑 • 2023-12-08 19:58:52 • 常见问答 • 阅读 3

质粒与目的基因为什么会反向连接？

a.质粒是基因工程中的载体，一般用于将目标基因转移到受体细胞中，有误；b和紫外线不是基因工程的工具，一般用于诱导基因突变，有误；c和dna连接酶一般用于连接目标基因和质量切割形成重组质粒，具有c错；d和限制性内切酶能识别双链dna分子的一个特定核苷酸序列，它能破坏每个链特定部分两个核苷酸之间的磷酸二酯键，一般用于基因工程中提取目标基因。d是正确的。然而，如果使用一种酶，载体必须去磷酸化。否则，大多数载波自连接形成空载波。如果载体去磷酸化，片段将以阳性和阴性两种方式插入载体。如果片段相对较小，则片段很可能会串联多次，然后连接到载体中。目的基因被切割后，产生粘端。如果靶基因反转180°与质粒连接或不连接，则产生两个完全不同的质粒

限制性内切酶的大多数识别位点是反向对称的。如果只使用相同的酶，则获得的片段的两个末端序列是相同的。连接时，它是随机的。不仅会发生反向连接，还会发生串联连接。

在分子克隆实验中，我们将用两种酶分别切割目标基因和质粒的上下游，以保证连接时目标片段和质粒片段的方向性。例如，ecori用于上游，bamh用于下游。

您对“目标基因和质粒不应被同一限制性内切酶切割”的理解意味着上游和下游使用相同的限制性内切酶，但不是上游和下游都使用相同的限制性内切酶。

防止目的基因反向连接 质粒与目的基因为什么会反向连接？

除了一些特殊情况外，我们还要用一种酶来切断上下游，这会导致大量的反向连接。连接后，我们需要选择更多的克隆进行识别。

个人意见，仅供参考，祝您一切顺利

为什么同种限制酶切割形成的末端相同时目的基因与质粒会反向连接，为什么会有反向连接这种情况。目的基因？

目的基因具有从起始密码子到终止密码子的方向性，只有通过正连接才能获得正确的克隆，构建的载体才能正确表达目的蛋白。

为什么同种限制酶切割形成的末端相同时目的基因与质粒会反向连接，为什么会有反向连接这种情况。目的基因？

质粒有自己的阅读顺序。如果目标基因反向连接，则根据质粒的阅读顺序，它不是目标基因。相反，它是目标基因。当然，它不能表达目的基因的蛋白质

基因表达载体含有基因表达所需的成分，如35s启动子等。

如果连接是反向的，当然不能表示。

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